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基礎(chǔ)信息Product information

產(chǎn)品名稱：

大鼠骨髓造血干細(xì)胞

產(chǎn)品簡介：

大鼠骨髓造血干細(xì)胞公司正在出售的產(chǎn)品：棕櫚酰化膜蛋白7抗體 KHOS-240S（人骨肉瘤細(xì)胞）兔氣管上皮細(xì)胞組蛋白去乙?；?+5+9抗體小鼠肝星狀細(xì)胞 17β羥類固醇脫氫酶7抗體人小氣道平滑肌細(xì)胞磷酸化原癌蛋白CBL2抗體

產(chǎn)品型號(hào)：

廠商性質(zhì)：經(jīng)銷商

訪問量：644

更新時(shí)間：2024-11-05

產(chǎn)品特性Product characteristics

大鼠骨髓造血干細(xì)胞

大鼠骨髓造血干細(xì)胞

商品屬性：

組織來源	產(chǎn)品規(guī)格	細(xì)胞形態(tài)	貨號(hào)
骨髓	5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶	圓形	YS-01X8233

細(xì)胞簡介：

大鼠骨髓造血干分離自骨髓；骨髓是機(jī)體的造血組織，位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動(dòng)物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細(xì)胞、血小板和各種白細(xì)胞。血小板有止血作用，白細(xì)胞能殺滅與抑制各種病原體，包括細(xì)菌、病毒等；某些淋巴細(xì)胞能制造抗體。因此，骨髓不但是造血器官，它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長骨（如肱骨、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中，是一種海綿狀的組織，能產(chǎn)生血細(xì)胞的骨髓略呈紅色，稱為紅骨髓。出生時(shí)，紅骨髓充滿全身骨髓腔，隨著年齡增大，脂肪細(xì)胞增多，相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代，最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。造血干細(xì)胞具有自我更新能力并能分化為各種血細(xì)胞的前提細(xì)胞，最終生成各種血細(xì)胞成分，包括紅細(xì)胞，白細(xì)胞和血小板。造血干細(xì)胞需要根據(jù)機(jī)體的生理需求適時(shí)的補(bǔ)充血液系統(tǒng)各個(gè)成熟細(xì)胞組分。同時(shí)在損傷、炎癥等應(yīng)激狀態(tài)下，造血干細(xì)胞也扮演著調(diào)節(jié)和維持體內(nèi)血液系統(tǒng)各個(gè)細(xì)胞組分的生理平衡的角色。臨床治療中，造血干細(xì)胞移植廣泛應(yīng)用于血液系統(tǒng)疾病以及自身免疫疾病，在其它實(shí)體瘤的治療中，比如淋巴瘤，生殖細(xì)胞瘤，乳腺癌，小細(xì)胞肺癌，主要應(yīng)用于常規(guī)治療失敗或復(fù)發(fā)難治以及具有不良預(yù)后因素的患者。造血干細(xì)胞以不對(duì)稱有絲分裂方式進(jìn)行增殖，一個(gè)干細(xì)胞分裂產(chǎn)生兩個(gè)子細(xì)胞，一個(gè)分化為造血祖細(xì)胞，另一個(gè)則保持干細(xì)胞特征。造血干細(xì)胞在不斷體外培養(yǎng)產(chǎn)生大量造血祖細(xì)胞同時(shí)，保持自己既不增殖也不分化。體外培養(yǎng)微環(huán)境合適，造血干細(xì)胞可持續(xù)維持培養(yǎng) 60 天左右。造血干細(xì)胞體外增殖培養(yǎng)需要基質(zhì)細(xì)胞滋養(yǎng)（滋養(yǎng)層細(xì)胞），缺少滋養(yǎng)層細(xì)胞不增殖，無法長期培養(yǎng)，本產(chǎn)品為收集培養(yǎng)好的造血干懸浮細(xì)胞灌裝發(fā)貨，不包含滋養(yǎng)層，因此收貨后建議盡快實(shí)驗(yàn)。

原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件：

　　一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)

　　1、細(xì)胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性；

　　2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些，至少為5×108細(xì)胞/L；

　　3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng)；

　　4、胎牛血清濃度為10%-80%

　　5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

　　6、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落，漂?。?/p>

　　7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀，應(yīng)將原代細(xì)胞換液；

　　8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。

　　二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)

　　1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞；

　　2、短期培養(yǎng)，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行；

　　3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi)，進(jìn)行分瓶試驗(yàn)；

　　4、長期培養(yǎng)時(shí)，淋巴細(xì)胞中要加入生長因子，白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清，以利細(xì)胞生長；

　　5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次；

　　6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行。

方法簡介：

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠骨髓造血干采用沖洗骨髓、密度梯度離心、差速貼壁法結(jié)合培養(yǎng)基篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測：

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠骨髓造血經(jīng)CD34免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：懸浮

細(xì)胞形態(tài)：圓形

傳代特性：不建議傳代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

大鼠骨髓造血干體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài)。

大鼠骨髓造血干細(xì)胞

細(xì)胞傳代及凍存：

細(xì)胞傳代步驟

細(xì)胞凍存步驟

如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：

　　① 組織塊培養(yǎng)法

　　組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。

　　② 消化培養(yǎng)法

　?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

　　對(duì)于懸浮生長的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

　?、芷鞴倥囵B(yǎng)

　　器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

大鼠骨髓造血干細(xì)胞