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更新時間:2024-10-30
人小氣道平滑肌細胞
商品屬性:
組織來源 | 產品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
小氣道組織 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細胞樣 | YS-01X7059 |
細胞簡介:
人小氣道平滑肌分離自小氣道組織;臨床上通常將內徑小于2mm的小細支氣管稱為小氣道。小氣道具有氣流阻力小,但易阻塞的特點。在平靜吸氣時,空氣進入狹窄的鼻咽部,產生渦流。由于小氣道已無軟骨支持,在脫離纖維鞘嵌入肺組織后,管腔通暢性不象軟骨性氣道,易于受胸腔的壓力變化的影響。小氣道上皮細胞形成連續(xù)呼吸道內層,作為隔絕外界有害物質的物理和功能屏障發(fā)揮著的作用。小氣道位于肺泡和氣管的交界處,這些細胞在功能上能夠調節(jié)免疫反應、產生化學因子進行宿主防御、表達粘附分子,并可能通過HLA-DR表達呈遞抗原;它們還能產生液體有助于肺液的平衡。許多呼吸道疾病,如哮喘、支氣管炎、慢性阻塞性肺病和囊性纖維化,都涉及呼吸道表面上皮細胞的破壞;小氣道上皮細胞的培養(yǎng)可為防止呼吸道擴增疾病和重塑提供新的治療選擇。小氣道平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后,可見細胞貼壁伸展,細胞形態(tài)大小不一,呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形,核卵圓形、居中;2周后細胞匯合,多數(shù)細胞伸展呈長梭形,胞漿豐富,有分枝狀突起,細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,高低起伏;細胞密度低時,常交織成網狀;密度高時,則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快,4-6天即可匯合,并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。小氣道的生理功能特點:①小氣道阻力小;②氣流速度慢;③可調節(jié)控制通氣與血流比例。小氣管平滑肌細胞主要功能:①保持氣道張力維持小氣道形態(tài);②肺小氣道進行氣體交換,病變可引起換氣功能障礙;③炎癥、痰液阻塞或當氣道外壓大于氣道內壓時容易造成小氣道閉合、萎陷。小氣管平滑肌細胞與主要病生理變化:①支氣管炎;②肺氣腫;③慢性阻塞性肺疾病。
原代細胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網狀,應將原代細胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經靜置培養(yǎng)1周時,應將細胞懸液經低速離心后換液。
二、懸浮細胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行;
3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內,進行分瓶試驗;
4、長期培養(yǎng)時,淋巴細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,以利細胞生長;
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行。
方法簡介:
公司實驗室分離的人小氣道平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測:
公司實驗室分離的人小氣道平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右;3代以內狀態(tài)優(yōu)良
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調節(jié)作用。
公司正在出售的產品:
小鼠可溶性E選擇素(sE-selectin)試劑盒 96T/48T
小鼠可溶性Endoglin(ENG/sCD105)試劑盒 96T/48T
小鼠顆粒酶B(Gzms-B)試劑盒 96T/48T
小鼠顆粒酶A(Gzms-A)試劑盒 96T/48T
小鼠凝溶膠蛋白(Gelsolin)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human blood coagulation factor XII (F XII) ELISA Kit 人Ⅻ(FⅫ)試劑盒
Humanpro-gasin-releasingpeptide,ProGRPELISAKit 人胃泌素釋放肽前體(ProGRP)試劑盒 96T/48T 進口分裝
Human20-hydroxyeicosateaenoicacid,12-HETE試劑盒人12羥二十烷四烯酸(12-HETE)試劑盒規(guī)格:96T/48T
真菌/酵母纖維二糖酶(cellobiase)活性比色法定量試劑盒20次
MouseApolipoproteinH,Apo-HELISAKit小鼠載脂蛋白H(Apo-H)試劑盒規(guī)格:96T/48T
3號染色體開放閱讀框17抗體
蛋白激酶C抗體
CST6重組小鼠 Cystatin E / CST6 蛋白 Protein
半胱蛋白酶抑制劑3(CST3)重組蛋白 Recombinant Cystatin 3 (CST3)
CSNK2A2重組人 CSNK2A2 / CK2A2 蛋白 Protein
CSNK1G2 Protein Human 重組人 CSNK1G2 蛋白
KLRC1 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 NKG2A / NKG2 / CD159A / KLRC1 蛋白 (Fc 標簽)
Angiotensin II receptor(Ang II 0.5mgAngiotensin II receptor(Ang II ) 血管緊張素Ⅱ受體(抗原)
CSNK1G2 Protein Human 重組人 CSNK1G2 蛋白
FZD10重組小鼠 Frizzled-10 / FZD10 蛋白 (Fc 標簽)(Fc 標簽) Protein
IL20RB Protein Rat 重組大鼠 IL20RB 蛋白 (Fc 標簽)
TEK重組人 Tie2 / CD202b / TEK 蛋白 (His & GST 標簽) Protein
人小氣道平滑肌細胞大鼠三葉因子3(TFF3)試劑盒 ,英文名: TFF3 ELISA Kit
Mouse signal ansduction molecule (Smad1) ELISA Kit 小鼠信號轉導分子(Smad1)試劑盒
Ratcalcitoningenerelatedpeptide,CGRPELISAKit 大鼠降鈣素基因相關肽(CGRP)試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforHABPELISAKit大鼠透明質酸結合蛋白
細胞半胱蛋白酶-7(CASPASE-7)活性熒光定量試劑盒20次
Ratverylateappearingaigen,VLAELISAKit大鼠遲現(xiàn)抗原(VLA)試劑盒規(guī)格:96T/48T