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更新時間:2024-10-28
大鼠肺動脈平滑肌細胞
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
肺動脈 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細胞樣 | YS-01X8181 |
細胞簡介:
大鼠肺動脈平滑肌分離自肺動脈組織;肺動脈亦稱肺動脈干。在呼吸空氣的脊椎動物中,把靜脈血由心臟導向肺臟的動脈。肺動脈起于右心室,在主動脈之前向左上后方斜行,在主動脈弓下方分為左、右肺動脈,經(jīng)肺門入肺。肺動脈干位于心包內(nèi),為一粗短的動脈干。起自右心室,在升主動脈前方向左后上方斜行,至主動脈弓下方分為左、右肺動脈。左肺動脈較短,在左主支氣管前方橫行,分二支進入左肺上、下葉。右肺動脈較長而粗,經(jīng)升主動脈和上腔靜脈后方向右橫行,至右肺門處分為三支進入右肺上、中、下葉。肺動脈平滑肌細胞是肺血管的重要結(jié)構(gòu)細胞之一,在調(diào)控肺血管的收縮和舒張功能中有重要作用。肺動脈平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后,可見細胞貼壁伸展,細胞形態(tài)大小不一,呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形,核卵圓形、居中;2周后細胞匯合,多數(shù)細胞伸展呈長梭形,胞漿豐富,有分枝狀突起,細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,高低起伏;細胞密度低時,常交織成網(wǎng)狀;密度高時,則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快,4-6天即可匯合,并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。肺動脈平滑肌細胞的異常是肺動脈高壓發(fā)生發(fā)展的重要病理學特征,其凋亡和增殖失衡是肺血管重塑的關鍵。研究表明,急性和慢性缺氧均可導致肺動脈高壓,即缺氧性肺動脈高壓,推斷缺氧可能是通過促進肺動脈平滑肌細胞的增殖而參與缺氧性肺動脈高壓的發(fā)生發(fā)展。肺動脈平滑肌細胞主要功能:①細胞表面表達介質(zhì)(ICAM-1和VCAM-1)參與血管壁炎癥反應;②是多數(shù)重要動脈疾病的靶細胞。肺動脈平滑肌細胞與主要病生理變化:①平滑肌增生易致肺動脈高壓;②先天性肺動脈狹窄;③肺動脈栓塞。
方法簡介:
實驗室分離的大鼠肺動脈平滑肌采用 - 膠原酶聯(lián)合消化法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
實驗室分離的大鼠肺動脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):成纖維細胞樣
傳代特性:可傳3代左右
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
大鼠肺動脈平滑肌細胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
?、?消化培養(yǎng)法
③ 懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
人周期素依賴性激酶9(CDK-9)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human CDK9 (Cyclin Depende Kinase 9) ELISA Kit
人周期素依賴性激酶抑制因子2A(CDKN2A)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human CDKN2A (Cyclin Depende Kinase Inhibitor 2A) ELISA Kit
人軸突生長誘向因子1(n1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human n1 (Nein 1) ELISA Kit
人軸突生長誘向因子4(n4)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human n4 (Nein 4) ELISA Kit
豚鼠膽囊收縮素A受體(CCKAR)試劑盒 ,英文名: CCKAR ELISA Kit
Human cadherln related neuronal receptor 1 (C-1) ELISA Kit 人鈣粘蛋白相關的神經(jīng)受體1(C-1)試劑盒
rabbitProstaglandinE2,PG-E2ELISAKit 兔子前列腺素E2(PGE2)試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforB7-2/sCD86ELISAKit大鼠可溶性CD86
線蟲甲基磺酸甲酯(MMS)誘導突變試劑盒10次
rabbitbasicfibroblastgrowthfactor,bFGFELISAKit兔子堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)試劑盒規(guī)格:96T/48T
周期素依賴激酶1抗體
艾滋病病毒抗體
CD79B重組大鼠 CD79B / B29 蛋白 Protein
FGF1 (aFGF 0.5mgFGF1 (aFGF )(ECGF-beta)(HBGF-1) 肝素結(jié)合生長因子( 酸性成纖維細胞生長因子)(多肽片斷抗原)
CCL17重組人 CCL17 / TARC / SCYA17 蛋白 Protein
IL36A Protein Human 重組人 IL1F6 / IL36A 蛋白
EFNA5 Protein Mouse 重組小鼠 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白 (Fc 標簽)(Fc 標簽)
FGF1 (aFGF 0.5mgFGF1 (aFGF )(ECGF-beta)(HBGF-1) 肝素結(jié)合生長因子( 酸性成纖維細胞生長因子)(多肽片斷抗原)
IL36A Protein Human 重組人 IL1F6 / IL36A 蛋白
CD79B重組大鼠 CD79B / B29 蛋白 Protein
EFNA5 Protein Mouse 重組小鼠 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白 (Fc 標簽)(Fc 標簽)
CCL17重組人 CCL17 / TARC / SCYA17 蛋白 Protein
大鼠肺動脈平滑肌細胞小鼠去甲(NE)試劑盒
Human urokinase type plasminogen activator receptor (PLAUR/uPAR) ELISA Kit 人型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)試劑盒
Humanmammaliaargetofrapamyein,mTORELISAKit 人雷帕霉素靶蛋白(mTOR)試劑盒 96T/48T 進口分裝
GuineaPigmonocytechemotacticprotein4,MCP-4試劑盒豚鼠單核細胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)試劑盒規(guī)格:96T/48T
真菌/酵母細胞可溶性總蛋白制備試劑盒20次
MouseBrainderivedneuroophicfacor,BDNFELISAKit小鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)試劑盒規(guī)格:96T/48T
原代細胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,漂浮;
7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應將原代細胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,應將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行;
3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進行分瓶試驗;
4、長期培養(yǎng)時,淋巴細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,以利細胞生長;
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行。
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