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更新時間:2024-10-29
大鼠晶狀體上皮細胞
商品屬性:
組織來源 | 產品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
晶狀體組織 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 上皮細胞樣 | YS-01X7384 |
細胞簡介:
大鼠晶狀體上皮分離自晶狀體組織;晶狀體源自胚胎發(fā)育外胚層,僅含有上皮細胞及其產物,晶狀體囊膜作為屏障將晶狀體與其它類型細胞分開;因而,晶狀體上皮細胞培養(yǎng)既無神經和血管組織的干擾,又不受其它類型細胞如成纖維細胞的污染,保證了培養(yǎng)中細胞成分的單一性。晶狀體上皮細胞主要負責調節(jié)晶狀體的生理平衡,包括電解質和液體的輸送。在正常的發(fā)育過程中,晶狀體上皮細胞分化和成熟,然后遷移到晶狀體內部,產生晶體蛋白,自身也拉長而變成晶狀體纖維細胞,并最終失去細胞核和其它的細胞器。研究表明,晶狀體上皮細胞的分化和極化受到了眼部液體中的生長因子的調控,包括表皮生長因子和胰島素等。細胞貼壁后為扁平不規(guī)則多角形,呈單層生長、連成膜狀。晶狀體上皮細胞是緊密貼附于晶狀體前囊內表面的單層上皮細胞,其異常增殖和分化與白內障和后囊混濁的發(fā)生密切相關,體外培養(yǎng)是研究其生長規(guī)律的主要手段。
原代細胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網狀,應將原代細胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經靜置培養(yǎng)1周時,應將細胞懸液經低速離心后換液。
二、懸浮細胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行;
3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內,進行分瓶試驗;
4、長期培養(yǎng)時,淋巴細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,以利細胞生長;
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行。
方法簡介:
公司實驗室分離的大鼠晶狀體上皮采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法,并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測:
公司實驗室分離的大鼠晶狀體上皮經BFSP2(晶狀體蛋白)免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 上皮細胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數板計數。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
?、?消化培養(yǎng)法
③ 懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調節(jié)作用。
公司正在出售的產品:
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豬Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISAKit ELISA.
豬Ⅲ型膠原(ColⅢ)ELISAKit ELISA.
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PorcineNoradrenaline,NEELISAKit 豬去甲(NE)試劑盒 進口分裝
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呼吸道合胞病毒核蛋白抗體
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LAIR1 Protein Mouse 重組小鼠 LAIR1 蛋白 (His 標簽)
Integrin alpha 1 整合素α1抗原 0.5mgIntegrin alpha 1 整合素α1抗原
AMIGO2 Protein Human 重組人 AMIGO2 蛋白 (His 標簽)
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Humanchaperonin10,CPN10ELISAKit 人伴侶蛋白10(CPN10)試劑盒 進口分裝
Humancirculatingimmunecomplex,CIC試劑盒人循環(huán)免疫復合物(CIC)試劑盒
組蛋白H1激酶免疫共沉淀試劑盒10次
Humaudimealbovineserumalbumincheck-upELISAKit人的牛血清白蛋白殘留檢測試劑盒