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更新時間:2024-11-04
兔支氣管平滑肌細胞
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
支氣管 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細胞樣 | YS-01X7769 |
細胞簡介:
兔支氣管平滑肌分離自支氣管組織;支氣管(Bronchi),是指由支氣管分出的各級分枝,由支氣管分出的一級支氣管,即左、右主支氣管。左主支氣管與右主支氣管相比較,前者較細長,走向傾斜;后者較粗短,走向較前者略直,所以經(jīng)支氣管墮入的異物多進入右主支氣管。支氣管和支氣管還有以區(qū)別就是,支氣管是以“C"型的支氣管軟骨為支架,而支氣管不是。支氣管平滑肌細胞主要功能:①支氣管平滑肌細胞能維持支氣管張力,保持支氣管形態(tài);②支氣管平滑肌特異的超微結構特點和調(diào)節(jié)機制是支氣管正常生理功能的基礎;③支氣管平滑肌通過分泌細胞因子和趨化因子等促炎介質,發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能。支氣管平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后,可見細胞貼壁伸展,細胞形態(tài)大小不一,呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形,核卵圓形、居中;2周后細胞匯合,多數(shù)細胞伸展呈長梭形,胞漿豐富,有分枝狀突起,細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,高低起伏;細胞密度低時,常交織成網(wǎng)狀;密度高時,則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快,4-6天即可匯合,并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。
原代細胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應將原代細胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,應將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行;
3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進行分瓶試驗;
4、長期培養(yǎng)時,淋巴細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,以利細胞生長;
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行。
方法簡介:
實驗室分離的兔支氣管平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測:
實驗室分離的兔支氣管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):成纖維細胞樣
傳代特性:可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)優(yōu)良
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔支氣管平滑肌體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
?、?消化培養(yǎng)法
③ 懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
豬補體蛋白3(C3)ELISAKit ELISA.
豬骨鈣素/骨谷酸蛋白(OT/BGP)ELISAKit ELISA.
豬上腺素(EPI)ELISAKit ELISA.
豬脂蛋白α(Lp-α)ELISAKit ELISA.
豬(T)ELISA 試劑盒
Human haptoglobin / haptoglobin (Hpt/HP) ELISA Kit 人結合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)試劑盒
PorcineHeatShockProtein70,HSP-70ELISAKit 豬熱休克蛋白70(HSP-70)試劑盒 進口分裝
CLIAKitforAlpha-FodrinIgG/IgAELISAKit大鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA
血液精(arginine)含量化學比色法定量試劑盒20次
phytohaemagglinin,PHAELISAKit植物血凝素(PHA)試劑盒
EB病毒核抗原-3B抗體
受體輔助蛋白1抗體
FCGR1重組大鼠 CD64 / FCGR1A 蛋白 (His 標簽) Protein
HIV-1(human immunodeficiency virus type 1 0.5mgHIV-1(human immunodeficiency virus type 1) 艾滋病病毒-1/人類免疫缺陷病毒1型(抗原)
SCGN重組人 SCGN / Secretagogin 蛋白 (His 標簽) Protein
ANGPT4 Protein Human 重組人 Angiopoietin 4 / ANG4 / ANGPT4 蛋白 (His 標簽)
IFNG Protein Mouse 重組小鼠 IFNG / Interferon Gamma 蛋白
HIV-1(human immunodeficiency virus type 1 0.5mgHIV-1(human immunodeficiency virus type 1) 艾滋病病毒-1/人類免疫缺陷病毒1型(抗原)
ANGPT4 Protein Human 重組人 Angiopoietin 4 / ANG4 / ANGPT4 蛋白 (His 標簽)
FCGR1重組大鼠 CD64 / FCGR1A 蛋白 (His 標簽) Protein
IFNG Protein Mouse 重組小鼠 IFNG / Interferon Gamma 蛋白
SCGN重組人 SCGN / Secretagogin 蛋白 (His 標簽) Protein
兔支氣管平滑肌細胞大鼠肌鈣蛋白I(TNI)試劑盒 ,英文名: TNI ELISA Kit
Rat 17 hydroxycoicosteroids (17-OHCS) ELISA Kit 大鼠17羥皮質類固醇(17-OHCS)試劑盒
RatCollagenaseIELISAKit 大鼠膠原酶I(CollagenaseI)試劑盒 進口分裝
CLIAKitforET-1(HumanEndothelin1)ELISAKit人內(nèi)皮素1
細胞亮(leucine)含量比色法定量試劑盒20次
Ratmaixmetalloproteinase1,MMP-1ELISAKit大鼠基質金屬蛋白酶1(MMP-1)試劑盒